ПЦР на ДНК цитомегаловируса (ЦМВ): сущность метода, достоинства и недостатки, используемые материалы

Цитомегаловирус относится к семейству герпесвирусов и считается одним из наиболее распространенных. Согласно статистике, к концу жизни этим вирусом заражены 90% населения. Наиболее результативный способ его обнаружения – ПЦР (полимеразная цепная реакция). В некоторых случаях ПЦР на ЦМВ – единственный способ выявить вирус.

Суть метода

Суть анализа заключается в выявлении и исследовании ДНК цитомегаловируса во взятом биологическом материале пациента. Проводится ПЦР цитомегаловирус на профессиональном медицинском оборудовании в лаборатории.

Название «цепная» реакция носит потому, что размножение проходит в несколько этапов:

1. Подготовка полученных материалов для исследования. Во время этого разъединяют нити ДНК.
2. Объединение материала со специальными «затравками». «Затравки» производятся отдельно для каждого вируса или бактерии.
3. Копирование генетического материала возбудителя. Например, если в исходной пробе было 100 молекул ДНК ЦМВ, то после первого цикла копирования их станет 200. Чтобы получить достаточное количество материала проводят 30-50 циклов.

Как итог проведенного анализа – визуальное исследование пробы, сравнение полученных результатов с эталонами в базе. Только после этого лечащий врач сможет поставить диагноз и назначить соответствующее лечение.

Так как зачастую вирус cytomegalovirus hominis никаким образом не проявляет свое присутствие в организме человека, о нем многие годы можно и не знать.

Но врачи выделили несколько групп людей, которым показано сдать анализ на CMV:

• женщины в период подготовки к зачатию и во время беременности;
• младенцы;
• дети, постоянно болеющие ОРВИ;
• наличие злокачественных новообразований;
• люди, принимающие цитостатики.

Активная фаза заражения проявляется определенной симптоматикой.

Именно обращая внимание на нее, врач может заподозрить наличие цитомеловируса:

• высыпания на коже;
• снижение остроты зрения;
• проблемы в работе органов ЖКТ;
• постоянные выкидыши;
• болезни мочеполовой системы;
• лихорадка.

Помимо этого, о вирусе могут говорить постоянные ОРВИ и простудные заболевания, так как симптомы инфицирования схожи с обычной простудой.

Плюсы и минусы

В сравнении с другими анализами ПЦР обладает массой преимуществ.

1. Возможность брать пробу из любой жидкости в организме человека.
2. Быстрое получение результатов (не более двух суток после сдачи).
3. Возможность выявить ДНК цитомегаловируса в «спящей» стадии и на начальных этапах.
4. Высокая точность обнаружения ЦМВ методом ПЦР – 90-95%.
5. Минимальная погрешность составляет – 3-5%.

Но тем не менее, ПЦР анализ обладает и своими минусами.

К ним можно отнести:

1. Отсутствие возможности отличить активную стадию инфицирования от латентной.
2. Сложность в определении степени патогенности, агрессивности и давности заражения.
3. Невозможность спрогнозировать, как в дальнейшем будет вести себя вирус.
4. Необходимость применения дополнительных способов диагностики для уточнения полученных данных.

Какие материалы используются при диагностике

Обнаружить цитомегаловирус посредством ПЦР можно в биологических жидкостях организма:

• крови;
• посеве изо рта;
• грудном молоке;
• моче;
• спинномозговой жидкости;
• мокроте слюны;
• сперме;
• Влагалищных выделениях.

Кровь берется для анализа, если врач подозревает развитие острого респираторного заболевания. Если существует подозрение на возникновение инфекционного процесса после полового акта, на исследование берут сперму у мужчины и мазок на цитомегаловирус из влагалища у женщины.

Какой именно материал будет использоваться для анализа ПЦР решает только лечащий врач.

Требования при сдаче ПЦР на цитомегаловирус

То, насколько будут достоверен и точен будет результат анализа ПЦР на цитомегаловирус, определяется несколькими факторами:

• качеством реактивов;
• правильной подготовкой пациента;
• ответственностью и опытом сотрудников лаборатории.

Существует несколько правил, выполнение которых необходимо во время подготовки к сдаче материала:

1. За два дня до сбора материала нельзя пить антибиотики. Прием других лекарственных средств нужно согласовать с лечащим врачом.
2. За 60 минут до процедуры нельзя курить.
3. За 48 часов до анализа категорически запрещено употреблять спиртные напитки, а также жирную пищу.
4. Не стоит также проходить ректальные осмотры, некоторые физиотерапевтические процедуры, рентгенографию. Все это может сказаться на достоверности результатов.
5. Кровь сдает утром натощак. Если же кровь нужно сдать вечером, то перед этим нельзя есть в течение 6 часов.
6. Женщинам при подготовке к сдаче соскоба из влагалища нельзя спринцеваться и вводить медицинские препараты (за сутки), не заниматься сексом (за трое суток). Соскоб берут на пятый день от начала либо до пятого дня до конца планируемого завершения менструации. Последнее мочеиспускание перед анализом должно быть как минимум 2 часа назад.
7. Моча для анализа собирается утром натощак и доставляет в лабораторию не позднее трех часов после сбора.
8. Перед анализом слюны нельзя чистить зубы и завтракать, так как это может изменить результаты анализов.

Как сдается и сроки готовности результатов

Процедура сдачи ПЦР ничем не отличается от других видов анализов. Работник лаборатории берет кровь из вены либо мазки из влагалища или рта при помощи стерильных приборов. Если же в качестве материала предоставляется моча, пациент сам приносит подготовленный по всем правилам материал в лабораторию и передает сотрудникам. После этого проводится непосредственно сам анализ. Выявление ДНК вируса занимает обычно до двух суток.

Расшифровка результатов

Положительный результат определяют, если:

• обнаружено ДНК цитомегаловируса в сданном материале;
• Мочевина, присутствующая в пробе дала ложноположительный результат, что говорит о том, что пациент нарушил правила сдачи анализа.

Отрицательный результат отмечается, если:

• фрагмент ДНК цитомегаловируса не был найден и инфекций нет;
• в сданном материале нет достаточного количества эпителиальных клеток, так как были нарушены правила сбора материала.

Полученные результаты могут представляться в процентах.

Чтобы получить максимально точную и качественную картину, также необходимо определять уровень антител в материале. IgM и IgG являются специфическими иммуноглобулинами, а степень авидности показывает насколько плотно они связаны с антигенами вируса. Высокая авидность исключает тот вариант, когда инфицирование произошло впервые.

Если ДНК не было найдено в лимфе крови, но вирус обнаружен в мазке, а IgG – высокоактивные, это свидетельствует о том, что первичное инфицирование произошло примерно год назад и ЦМВ находится в организме пациента.

Если ДНК найдено в сданном материале, а IgG, IgM низкоавидные, то это показывает, что происходит первичное инфицирование проходит активную фазу.

Если дезоксирибонуклеиновая кислота цитомегаловируса была обнаружена, а специфические иммуноглобулины высокоавидные, можно сделать вывод что латентная стадия начала переходить в активную. Титры Ig в подобном случае повышаются более чем в четыре раза.

Первичное инфицирование, проходящее в активной фазе, является наиболее опасным во время беременности, т.к. существует очень большой риск развития у будущего ребенка серьезных патологий. Если заражение у женщины произошло в первые три месяца беременности, это может привести к замершей беременности.

Стоит обращать внимание на то, что результаты анализов из разных «источников» иногда отличаются. Это обозначает, что определить способ заражения вирусом не представляется возможным.

Методы лечения

К сожалению, после инфицирования попытки полностью избавиться от вируса будет тщетными, так как ЦМВ навсегда остается в организме. Зачастую заражение ЦМВ переносится достаточно легко и никак себя не проявляет. После того как ЦМВ попал в организм, находиться в нем он будет в «спящем» состоянии, и только в случае сильного понижения иммунитета может проявиться и вызвать осложнения. Лечение необходимо предпринимать только в том случае, если вирус представляет опасность для здоровья и жизни зараженного.

Терапия зачастую проводится при помощи медикаментов:

• противовирусных препаратов, предотвращающих развитие возбудителя;
• иммуноглобулинов, которые связывают и уничтожают частицы вируса;
• иммуномодуляторы, укрепляющие и восстанавливающие иммунитет;
• препараты посиндромной терапии, которые способствуют восстановлению пораженных тканей и органов;
• препараты, помогающие снять симптоматику (капли в нос, обезболивающие и пр.).

Некоторые препараты токсичны, обладают своими противопоказаниями и могут приводит к развитию побочных явлений. Именно поэтому ни в коем случае нельзя заниматься самолечением, так как это может привести к совершенно противоположному эффекту.